日期：2022-02-22类别：时事资讯标签：TCSPC,高光谱,光纤激光器,显微镜
近年来，显微镜发生了翻天覆地的变化。虽然有大量可用的显微技术，但您可能需要考虑哪种类型的显微技术与您的生物学问题更相关。我们提供了一个通用指南来选择适合您的显微技术。
透射光显微镜
透射光是一种非常简单且无干扰的测量细胞行为的技术。它不需要任何特殊的准备，例如基因编码。因为与荧光激发相比，透射光对标本的破坏往往较小，因此它是一种观察细胞行为而不会造成任何光损伤的优秀技术。
荧光显微镜
另一方面，测量细胞或特定细胞器中的特定分子需要相应的分子标记和荧光显微镜。荧光显微镜是生物研究中使用最广泛的成像方式之一。它提供高对比度成像和高特异性。它还与活细胞成像兼容，并提供对活体样本的监测，且干扰相对较小。 具有相当快的时间分辨率还使我们能够实时探测细胞中发生的动态。荧光显微镜是一种非常强大的工具，可以同时以高分子特异性监测和探测细胞内的不同基因产物。然而，荧光显微镜的缺点是分辨率仅限于几百纳米。
有许多不同类型的基于穿透深度的荧光显微技术可用。要选择正确的技术，您需要考虑要研究的标本类型。你在看一个厚的还是薄的标本？第二个问题是你看的是活样本还是固定样本？虽然采集时间和光损伤对于固定样本不是很重要的因素， 但对于活细胞，我们应该考虑在不损坏细胞的情况下观察细胞动态的速度有多快。
图1。落射 荧光显微镜示意图（左）和样品图像（右）
1-1 落射荧光（宽场）
落射荧光是一种低成本技术，因为它不需要激光作为激发源。它可用于对超过 10µm 深的大量固定细胞进行成像。然而，由于焦平面中的离焦荧光贡献，图像中存在高背景信号。在图像中产生大量雾度会阻止我们获得漂亮、清晰和清晰的图像。此外，落射荧光穿透整个细胞，荧光激发可能会损坏细胞。
1-2 反卷积显微镜
反卷积显微镜是一种计算技术，可以消除离焦荧光的影响。该技术需要一个落射荧光显微镜和一个电动 z 轴步进器来拍摄通过样本的不同 z 截面的图像。软件用于执行计算校正和锐化对焦光。 落射荧光是非常低成本的成像技术，因为它不需要激光作为激发源。